Diabetologia：激活但功能受损的记忆Tregs在1M-糖尿病患者进展缓慢的过程中逐渐扩展

从第一次显现出人体内自身免疫到显现出1标准型哮喘医学症状的十分困难赴援在孩童时期就有很好的叙述，多个人体内自身免疫感染性的孩童中的有70%在血清转换后10年内患上哮喘，而随访15年的孩童这一%-降低到84%。来得之下，九成医学1标准型哮喘一半以上的标准型1标准型哮喘的发病机制还没有得到充分的研究工作。

越来越多的人开始常用分期系统来定义1标准型哮喘的十分困难：生殖在显现出多种人体内自身免疫时转回第1阶段，显现出血糖异常时转回第2阶段，显现出症状时转回第3阶段。一些多发人体内自身免疫感染性的生殖，在1期和2期，十分困难较极快，并持续发展为发病的1标准型哮喘。我们之后叙述了一分组在首次检测到多种人体内自身免疫取样后大概10年无哮喘的亦非极快十分困难者，这分组患儿伤亡人数极少，但特点比较明确。随后，我们发现人体内自身免疫特异性CD8+T巨噬细胞反应在十分困难较极快的患儿中的整体不普遍存在，但在近期发病和近十年普遍存在的哮喘患儿中的很非常容易检测到。这有可能证明，与十分困难患儿来得，这些患儿自身突变的通气提高。

早期研究工作证明，尽管通气性T巨噬细胞(Treg)数量正常，但哮喘患儿普遍存在一些功能缺陷，其中的以外对IL-2的反应能力降低。此外，哮喘患儿中的的物理现象CD4+T巨噬细胞有可能对通气更具抵抗性，观感为物理现象T巨噬细胞的依赖性向西移动，自然现象诱发的Treg和体外诱发的其会Treg，以及免疫经历的CD4+T巨噬细胞中的IL-2反应向西移动。本研究工作的目的是叙述了CD4+通气性T巨噬细胞(Treg)在海岸边亦非较极快十分困难者中的的特点，他们的平均年龄为43岁(31-72岁)，随访时间为18-32年。

方法：BOX研究工作是一项以一些人为基础的主干研究工作，在21岁以下发病的患儿亲属中的检查1标准型哮喘的危险各种因素。我们之后叙述了近十年较极快十分困难者的特点，他们依然多重人体内自身免疫感染性超过10年，但没有显现出哮喘的医学症状，极快性或非顺利完成性自身免疫。随后，10名此后依然无哮喘并不愿提供大量肠道取样的较极快十分困难者纳入T和B巨噬细胞功能量化。在目前的研究工作中的，8名极快十分困难者(SP分组)，中的位年龄43岁(31-72岁)，18 - 32岁之间的人体内自身免疫感染性。所有的参与者都处于1标准型哮喘十分困难的1期，尽管一些人随后失去了人体内自身免疫对某些免疫的感染性反应，然而，一名患儿已经处于2期大概6年，但没有显现出医学症状，一名患儿被病患为哮喘，该受试者72岁，在采集实验取样时，其HbA1c升高到53 mmol/mol(7%)，在数据量化中的对该小分弟顺利完成了原则上评量。分离出来外周血单个核巨噬细胞(PBMCs)，运用于多参数流式巨噬细胞法术和T巨噬细胞依赖性测试评量小分弟中的Treg的频赴援、表标准型和功能。常用FlowSOM和CITRUS(聚类鉴别、表征和重回)顺利完成无全权负责聚类量化，评量Treg表标准型。

结果：与身心健康小分弟来得，来自极快十分困难体的潜意识CD4+T巨噬细胞的全权负责聚类标示出，激已逝的潜意识CD4+ Treg频赴援降低，与糖皮质激素其会的TNFR特别细胞(GITR)隐含降低有关。一名HbA1c升高的患儿与十分困难较极快者和匹配的对照分组来得，Treg序有所不同。功能量化证明，与身心健康小分弟来得，来自较极快十分困难体的Treg特异性的CD4+物理现象T巨噬细胞依赖性明显受损。观感为对物理现象CD4+T巨噬细胞CD25和CD134隐含的依赖性降低。

绘出1 深入的表标准型量化标示出，CD4+Treg亚标准型在极快十分困难队列中的降低。由FlowSOM作用于的Treg室，聚集在来自所有小分弟的已逝CD4+CD45RA -巨噬细胞上。根据上标物隐含鉴别出10个元簇:潜意识T巨噬细胞_1;潜意识T cell_2;潜意识T cell_3;潜意识T cell_4;CD49b潜意识T巨噬细胞;HLA-DR + GITR +潜意识T巨噬细胞;磁盘Treg_1;磁盘Treg_2;磁盘Treg_3;和磁盘Treg_4。(a)常用9个不同Treg上标作用于的10个元簇的MST。每个节点象征性一个集群(100个集群)，较大的元集群(10个元集群)在节点分组周遭剪裁。每个节点中的的饼绘出坚称单个上标的隐含级别。(b)每个元聚类的热绘出，以标示出整体上标隐含。(c, d)为HD分组(c)和SP分组(d)作用于绘出，以及FlowSOM辨别的每个元簇的覆盖层。(e-l)相对丰度为每个metacluster筒线或绘出(丰度> 0.05%)具体为HD和SP分组:磁盘Treg_2 (e),磁盘Treg_3 (f),磁盘Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +潜意识T巨噬细胞(h)、潜意识T cell_1(i),潜意识T cell_2 (j),潜意识T cell_3 (k) n d CD49b潜意识T巨噬细胞(l)。浅金色白点象征性**SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon匹配大写秩检验。此键适用于绘出形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

绘出2 常用CITRUS的量化证明证实，Treg频赴援的降低是十分困难较极快的标志。国际标准门控(a - f)和柑橘量化(g-k)比较SP参与者和匹配的HD参与者在CD4+CD45RA−T巨噬细胞上的差异。(a)亲本CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l族群的象征性性绘出。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3富集，然后通过HLA-DR和GITR隐含顺利完成分离出来，模拟FlowSOM族群。(b) HD(黑点)和SP(黑纹)分组以及小分弟SP 606(浅金色)中的CD25+ cd127的频赴援汇总绘出。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+门控弟集的筒线或绘出;(c) HLA-DRloGITR−(磁盘Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(磁盘Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(磁盘Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+磁盘T cell)。(g - i)柑桔簇螺旋形由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3隐含强度制做，记号突出的簇被辨别为SP和HD队列之间的不同。(j)筒线或绘出标示出了在SP(黑纹)和HD(灰点)分组中的，CITRUS潜意识Treg_3和Treg_4的相对丰度(%-)。(k)直方绘出标示出每个簇的表标准型(粉红色)和Treg上标相对隐含与背景隐含(金色);上列，磁盘Treg_3;下面四人，磁盘Treg_4。背景与所有其他簇中的上标的隐含有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon匹配大写秩检验

绘出3 与身心健康献血者来得，十分困难较极快者潜意识treg的GITR降低。每个潜意识CD4+T巨噬细胞元簇(潜意识T巨噬细胞_1;潜意识T cell_2;潜意识T cell_3;CD49b +潜意识T巨噬细胞;HLA-DR + GITR +潜意识T巨噬细胞;磁盘Treg_2;磁盘Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)检测每个隐含上标的变化。(a,b)来自HD (a)和S (b)队列的隐含热绘出(sp606不以外在内)。(c,d)潜意识Treg_4元簇中的所有HD(灰色)、所有SP(金色)和SP 606(浅金色)的FlowSOM GITR隐含串联，标示出直方绘出(c)和汇总绘出(d)。Wilcoxon匹配大写秩和检验，p< 0.07(浅金色)所有小分弟以外，p< 0.05(金色)小分弟SP 606和匹配的HD不以外在测试中的。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs中的GITR隐含，从国际标准门控，从所有HD(灰色)、所有SP(金色)和SP 606(浅金色)串联，标示出直方绘出(e)和汇总绘出(f) *p< 0.05, Wilcoxon匹配大写秩检验

绘出4 来自较极快十分困难的CD4+ treg巨噬细胞控制物理现象CD4+T巨噬细胞的能力降低。SP分组用金色的线或和白点坚称，HD分组用黑色的线或和白点坚称，浅金色的线或/白点坚称小分弟sp606。常用CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T巨噬细胞顺利完成分选。CD4+CD25−(应答者)被上标为CFSE, Treg按观察的%-指示剂。用抗CD3 /28微珠转化巨噬细胞，人才3天后顺利完成流式巨噬细胞法术检测。(a-d)与CD4+应答者相对应的treg人才(complex)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD应答者人才。(a,b,f) CFSE再生(a,e)和CFSE依赖性%-(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的依赖性%-。常用感染性对照(激已逝的鼓动巨噬细胞不含treg)计算依赖性%-。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差量化。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

绘出5 物理现象CD4+T巨噬细胞对较极快十分困难的T巨噬细胞转化的依赖性更尖锐。SP分组用金色的线或和白点坚称，HD分组用黑色的线或和白点坚称，浅金色的线或/白点坚称小分弟sp606。常用CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T巨噬细胞顺利完成分选。CD4+CD25−(应答者)被cfsel上标，treg按观察的%-指示剂。用抗CD3 /28微珠转化巨噬细胞，人才3天后顺利完成流式巨噬细胞法术(CD25反染)和巨噬细胞因弟量化。HD Treg与HD、SP或sp606应答者共同人才。(a,b) CFSE再生(a)和CFSE依赖性百分赴援(b)。(c,d) CD25依赖性百分赴援(c)和CD134依赖性百分赴援(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共人才中的的隐含。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差量化。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

论据：我们得出的论据是，来自较极快十分困难弟的转化潜意识CD4+Treg在GITR隐含中的得到了扩展和充沛，强调了有利于研究工作Treg在1标准型哮喘风险生殖中的的表标准型的必要性。

原文引自：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28