Diabetologia：激活但基本功能受损的记忆Tregs在1型糖尿病患者进展缓慢的过程中逐渐扩展

从第一次显现胰脏自身抗原到显现1同型心血管疾病临床研究征状的的发展所部在儿童初就有很好的详细描述，多个胰脏自身抗原白血病的儿童中会有70%在血清类比后10年内患上心血管疾病，而随访15年的儿童这一%-提高到84%。远比之下，占临床研究1同型心血管疾病一半以上的同型1同型心血管疾病的发病的该系统还从未得到前提的研究成果。

越来越多的人开始可用分期该系统来下定义1同型心血管疾病的的发展：有机微在显现多种胰脏自身抗原时转回第1期中会，显现血糖极度时转回第2期中会，显现征状时转回第3期中会。一些多发胰脏自身抗原白血病的有机微，在1期和2期，的发展较慢速，并发展为发病的1同型心血管疾病。我们之前详细描述了一一组在首次检查到多种胰脏自身抗原验证后数10年无心血管疾病的极慢速的发展者，这一组病患者人数少，但特质非常明确。随后，我们发现胰脏自身抗原特异性CD8+T酶反不应在的发展平稳的病患者中会基本不依赖于，但在近期发病和肇因的心血管疾病病患者中会很容易检查到。这可能说明，与的发展病患者远比，这些病患者胃溃疡反不应的调节增强。

早期研究成果说明，尽管调节性T酶(Treg)需求量情况下，但心血管疾病病患者依赖于一些动态缺陷，其中会最主要对IL-2的反不应控制能力降低。此外，心血管疾病病患者中会的现像CD4+T酶可能对调节极富抵抗性，表现为现像T酶的选择性减慢速，自然造成了的Treg和微外造成了的其会Treg，以及抗原经历的CD4+T酶中会IL-2反不应减慢速。本研究成果的目标是详细描述了CD4+调节性T酶(Treg)在一小群极平稳的发展者中会的特质，他们的年长为43岁(31-72岁)，随访时间为18-32年。

方法：BOX研究成果是一项以人群该系统化的纵向研究成果，在21岁以下确诊的病患者亲人中会检查1同型心血管疾病的脆弱因素。我们之前详细描述了长期平稳的发展者的特质，他们保持良好多重胰脏自身抗原白血病超过10年，但从未显现心血管疾病的临床研究征状，慢速性或非同步变性胃溃疡。随后，10名一直保持良好无心血管疾病并愿意提供大量血浆验证的平稳的发展者纳入T和B酶动态生物信息学。在现在的研究成果中会，8名慢速的发展者(SP一组)，中会位年龄43岁(31-72岁)，18 - 32岁中间的胰脏自身抗原白血病。所有的旁观者都处于1同型心血管疾病的发展的1期，尽管一些人随后失去了胰脏自身抗原对某些抗原的白血病反不应，然而，一名病患者已经处于2期数6年，但从未显现临床研究征状，一名病患者被病人为心血管疾病，该受试者72岁，在采集测试验证时，其HbA1c增高到53 mmol/mol(7%)，在数据生物信息学中会对该其会同步进行了除此以外风险评估。受控外周血单个核酶(PBMCs)，采用多参数流式酶心法和T酶选择性次测试风险评估其会中会Treg的频所部、表同型和动态。可用FlowSOM和CITRUS(聚类鉴定、表征和回归)同步进行无行政官员聚类生物信息学，风险评估Treg表同型。

结果：与健康其会远比，来自慢速的发展微的潜意识CD4+T酶的行政官员聚类结果显示，；也的潜意识CD4+ Treg频所部提高，与糖皮质激素其会的TNFR之外酶(GITR)解读提高有关。一名HbA1c增高的病患者与的发展平稳者和比如说的对照一组远比，Treg谱略有不同。动态生物信息学说明，与健康其会远比，来自平稳的发展微的Treg介导的CD4+现像T酶选择性明显受损。表现为对现像CD4+T酶CD25和CD134解读的选择性提高。

图1 熟悉的表同型生物信息学结果显示，CD4+Treg亚同型在慢速的发展链表中会提高。由FlowSOM转化成的Treg室，聚集在来自所有其会的活CD4+CD45RA -酶上。根据标识物解读鉴定出有10个元簇:潜意识T酶_1;潜意识T cell_2;潜意识T cell_3;潜意识T cell_4;CD49b潜意识T酶;HLA-DR + GITR +潜意识T酶;寄存器Treg_1;寄存器Treg_2;寄存器Treg_3;和寄存器Treg_4。(a)可用9个不同Treg标识转化成的10个元簇的MST。每个结点象征性一个战斗群(100个战斗群)，大得多的元战斗群(10个元战斗群)在结点一组周围手工。每个结点中会的年糕图对此单个标识的解读级别。(b)每个元聚类的热图，以结果显示总微标识解读。(c, d)为HD一组(c)和SP一组(d)转化成图，以及FlowSOM辨认的每个元簇的覆盖层。(e-l)相比之下重元素为每个metacluster筒点阵图(重元素> 0.05%)确定为HD和SP一组:寄存器Treg_2 (e),寄存器Treg_3 (f),寄存器Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +潜意识T酶(h)、潜意识T cell_1(i),潜意识T cell_2 (j),潜意识T cell_3 (k) n d CD49b潜意识T酶(l)。橘色左上方象征性**SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon一一组符号秩验证。此键适用于图形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

图2 可用CITRUS的生物信息学说明属实，Treg频所部的提高是的发展平稳的字样。PG门控(a - f)和棉花生物信息学(g-k)相当SP旁观者和比如说的HD旁观者在CD4+CD45RA−T酶上的差异。(a)亲本CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l族裔的象征性性图。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3富集，然后通过HLA-DR和GITR解读同步进行受控，模拟FlowSOM族裔。(b) HD(黑点)和SP(黑斑)一组以及其会SP 606(橘色)中会CD25+ cd127的频所部汇总图。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+门控兄集的筒点阵图;(c) HLA-DRloGITR−(寄存器Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(寄存器Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(寄存器Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+寄存器T cell)。(g - i)玉米簇螺旋由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3解读准确度着色，箭头引人注目有的簇被辨认为SP和HD链表中间的不同。(j)筒点阵图结果显示了在SP(黑斑)和HD(灰点)一组中会，CITRUS潜意识Treg_3和Treg_4的相比之下重元素(%-)。(k)直方图结果显示每个簇的表同型(粉色)和Treg标识相比之下解读与时代背景解读(白色);上列，寄存器Treg_3;比如说一行，寄存器Treg_4。时代背景与所有其他簇中会标识的解读有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon一一组符号秩验证

图3 与健康献血者远比，的发展平稳者潜意识treg的GITR提高。每个潜意识CD4+T酶元簇(潜意识T酶_1;潜意识T cell_2;潜意识T cell_3;CD49b +潜意识T酶;HLA-DR + GITR +潜意识T酶;寄存器Treg_2;寄存器Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)检查每个解读标识的发生变化。(a,b)来自HD (a)和S (b)链表的解读热图(sp606不最主要在内)。(c,d)潜意识Treg_4元簇中会所有HD(灰色)、所有SP(白色)和SP 606(橘色)的FlowSOM GITR解读串联，结果显示直方图(c)和汇总图(d)。Wilcoxon一一组符号秩和验证，p< 0.07(橘色)所有其会最主要，p< 0.05(白色)其会SP 606和比如说的HD不最主要在测试中会。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs中会GITR解读，从PG门控，从所有HD(灰色)、所有SP(白色)和SP 606(橘色)串联，结果显示直方图(e)和汇总图(f) *p< 0.05, Wilcoxon一一组符号秩验证

图4 来自平稳的发展的CD4+ treg酶控制现像CD4+T酶的控制能力降低。SP一组用白色的该线和左上方对此，HD一组用粉色的该线和左上方对此，橘色的该线/左上方对此其会sp606。可用CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T酶同步进行分选。CD4+CD25−(不；也者)被标识为CFSE, Treg按观察的%-质子化物。用抗CD3 /28微珠活化酶，培育3紧接著同步进行流式酶心法检查。(a-d)与CD4+不；也者相比之下不应的treg培育(自微)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD不；也者培育。(a,b,f) CFSE增殖(a,e)和CFSE选择性一般而言(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的选择性一般而言。可用白血病对照(；也的响不应酶不含treg)计算出来选择性一般而言。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差生物信息学。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重相当测试

图5 现像CD4+T酶对平稳的发展的T酶活化的选择性更适合于。SP一组用白色的该线和左上方对此，HD一组用粉色的该线和左上方对此，橘色的该线/左上方对此其会sp606。可用CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T酶同步进行分选。CD4+CD25−(不；也者)被cfsel标识，treg按观察的%-质子化物。用抗CD3 /28微珠活化酶，培育3紧接著同步进行流式酶心法(CD25反染)和酶因兄生物信息学。HD Treg与HD、SP或sp606不；也者共同培育。(a,b) CFSE增殖(a)和CFSE选择性百分所部(b)。(c,d) CD25选择性百分所部(c)和CD134选择性百分所部(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在浙大中会的解读。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差生物信息学。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重相当测试

假设：我们结论有的假设是，来自平稳的发展兄的活化潜意识CD4+Treg在GITR解读中会得到了扩张和丰富，重申了进一步研究成果Treg在1同型心血管疾病风险有机微中会的异质性的实质。

译文出有处：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28