Diabetologia：激活但功能受损的记忆Tregs在1型冠心病患者进展缓慢的过程中逐渐扩展

从第一次显现出肝细胞自身突变到显现出1M-白血病针灸病征的重大突破领军在儿童时期就有很好的详细描述，多个肝细胞自身突变非典型的儿童中所有70%在毒素转换后10年中中风白血病，而随访15年的儿童这一比领军增大到84%。整躯而言，占针灸1M-白血病一半以上的M-1M-白血病的病症机制还未赢取充分的熟悉研究。

越来越多的人开始用于再行管理系统来定义1M-白血病的重大突破：个躯在显现出多种肝细胞自身突变时进入第1收尾，显现出血糖出现异常时进入第2收尾，显现出病征时进入第3收尾。一些多发肝细胞自身突变非典型的个躯，在1期和2期，重大突破很慢，并的发展为病症的1M-白血病。我们在此之前详细描述了一第举例来说在首次样品到多种肝细胞自身突变取样后至不及10年无白血病的近乎慢重大突破者，这第举例来说高血压人数不及，但特点不够为明确。随后，我们挖掘出肝细胞自身蛋白基因表达CD8+T蛋白质反应在重大突破加速的高血压中所基本不实际上，但在近期病症和由来已久的白血病高血压中所很容易样品到。这可能指出，与重大突破高血压远比，这些高血压致病反应的调控强化。

一时期熟悉研究指出，尽管调控性T蛋白质(Treg)数量经常性，但白血病高血压实际上一些机制缺陷，其中所除此以外对IL-2的反应能力降低。此外，白血病高血压中所的现象CD4+T蛋白质可能对调控极富抵抗性，发挥为现象T蛋白质的选择性减弱，自然产生的Treg和躯外产生的其会Treg，以及蛋白经历的CD4+T蛋白质中所IL-2反应减弱。本熟悉研究的最终目标是详细描述了CD4+调控性T蛋白质(Treg)在一小群近乎加速重大突破者中所的特点，他们的半数为43岁(31-72岁)，随访间隔时间为18-32年。

方法：BOX熟悉研究是一项以年轻人结合的纵向熟悉研究，在21岁一般而言确诊的高血压直系亲属中所检查1M-白血病的危险主因。我们在此之前详细描述了长年加速重大突破者的特点，他们维持多重肝细胞自身突变非典型超过10年，但未显现出白血病的针灸病征，慢性或非顺利完成性致病。随后，10名在此之前维持无白血病并愿意提供大量血液取样的加速重大突破者设为T和B蛋白质机制系统性。在现有的熟悉研究中所，8名慢重大突破者(SP第举例来说)，中所位年龄43岁(31-72岁)，18 - 32岁之间的肝细胞自身突变非典型。所有的参与者都处于1M-白血病重大突破的1期，尽管一些人随后丧失了肝细胞自身突变对某些蛋白的抽血，然而，一名高血压已经处于2期至不及6年，但未显现出针灸病征，一名高血压被诊断为白血病，该受试者72岁，在采集科学实验取样时，其HbA1c上升时到53 mmol/mol(7%)，在数据处理中所对该其会顺利完成了单独评核。除去外周血单个氘蛋白质(PBMCs)，运用于多参数流式蛋白质心法和T蛋白质选择性试验评核其会中所Treg的频领军、性状和机制。用于FlowSOM和CITRUS(聚类深入研究、表征和回归)顺利完成无监督聚类系统性，评核Treg性状。

结果：与健康其会远比，来自慢重大突破躯的潜意识CD4+T蛋白质的监督聚类推测，激活的潜意识CD4+ Treg频领军增大，与免疫抑制其会的TNFR相关蛋白(GITR)隐含增大有关。一名HbA1c上升时的高血压与重大突破加速者和匹配的对照第举例来说远比，Treg曲谱有所各不相同。机制系统性指出，与健康其会远比，来自加速重大突破躯的Treg介导的CD4+现象T蛋白质选择性明显损伤。发挥为对现象CD4+T蛋白质CD25和CD134隐含的选择性增大。

所示1 熟悉的性状系统性推测，CD4+Treg亚M-在慢重大突破路由表中所增大。由FlowSOM转化的Treg室，群聚在来自所有其会的活CD4+CD45RA -蛋白质上。根据标识物隐含深入研究出10个元簇:潜意识T蛋白质_1;潜意识T cell_2;潜意识T cell_3;潜意识T cell_4;CD49b潜意识T蛋白质;HLA-DR + GITR +潜意识T蛋白质;内氘Treg_1;内氘Treg_2;内氘Treg_3;和内氘Treg_4。(a)用于9个各不相同Treg标识转化的10个元簇的MST。每个路由表代表一个集群(100个集群)，不够大的元集群(10个元集群)在路由表第举例来说附近制做。每个路由表中所的粥所示回应单个标识的隐含层级。(b)每个元聚类的热所示，以推测整躯标识隐含。(c, d)为HD第举例来说(c)和SP第举例来说(d)转化所示，以及FlowSOM识别的每个元簇的覆盖层。(e-l)相对于核素为每个metacluster箱内示意所示(核素> 0.05%)确定为HD和SP第举例来说:内氘Treg_2 (e),内氘Treg_3 (f),内氘Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +潜意识T蛋白质(h)、潜意识T cell_1(i),潜意识T cell_2 (j),潜意识T cell_3 (k) n d CD49b潜意识T蛋白质(l)。紫色红色代表**SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon筛选符号秩检验。此键适用于所示形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

所示2 用于CITRUS的预测模M-证实，Treg频领军的增大是重大突破加速的标志。分级去极化(a - f)和甜菜系统性(g-k)比较SP参与者和匹配的HD参与者在CD4+CD45RA−T蛋白质上的相似之处。(a)亲本CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l群躯的权威性所示。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3富集，然后通过HLA-DR和GITR隐含顺利完成除去，演示FlowSOM群躯。(b) HD(黑点)和SP(蓝点)第举例来说以及其会SP 606(紫色)中所CD25+ cd127的频领军汇总所示。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+去极化可数的箱内示意所示;(c) HLA-DRloGITR−(内氘Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(内氘Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(内氘Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+内氘T cell)。(g - i)柑桔簇螺旋由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3隐含切变着色，箭头突出的簇被识别为SP和HD路由表之间的各不相同。(j)箱内示意所示推测了在SP(蓝点)和HD(灰点)第举例来说中所，CITRUS潜意识Treg_3和Treg_4的相对于核素(比领军)。(k)直方所示推测每个簇的性状(黑色)和Treg标识相对于隐含与背景隐含(浅蓝色);上列，内氘Treg_3;下面悄悄，内氘Treg_4。背景与所有其他簇中所标识的隐含有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon筛选符号秩检验

所示3 与健康献血者远比，重大突破加速者潜意识treg的GITR增大。每个潜意识CD4+T蛋白质元簇(潜意识T蛋白质_1;潜意识T cell_2;潜意识T cell_3;CD49b +潜意识T蛋白质;HLA-DR + GITR +潜意识T蛋白质;内氘Treg_2;内氘Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)样品每个隐含标识的变化。(a,b)来自HD (a)和S (b)路由表的隐含热所示(sp606不除此以外在内)。(c,d)潜意识Treg_4元簇中所所有HD(灰色)、所有SP(浅蓝色)和SP 606(紫色)的FlowSOM GITR隐含串联，推测直方所示(c)和汇总所示(d)。Wilcoxon筛选符号秩和检验，p< 0.07(紫色)所有其会除此以外，p< 0.05(浅蓝色)其会SP 606和匹配的HD不除此以外在测试中所。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs中所GITR隐含，从分级去极化，从所有HD(灰色)、所有SP(浅蓝色)和SP 606(紫色)串联，推测直方所示(e)和汇总所示(f) *p< 0.05, Wilcoxon筛选符号秩检验

所示4 来自加速重大突破的CD4+ treg蛋白质控制现象CD4+T蛋白质的能力降低。SP第举例来说用浅蓝色的本站和红色回应，HD第举例来说用紫色的本站和红色回应，紫色的本站/红色回应其会sp606。用于CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T蛋白质顺利完成分选。CD4+CD25−(需要的话者)被标识为CFSE, Treg按检视的比领军氢氧化钠。用抗CD3 /28微珠诱导蛋白质，培养出来3天内顺利完成流式蛋白质心法样品。(a-d)与CD4+需要的话者相对于应的treg培养出来(自躯)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD需要的话者培养出来。(a,b,f) CFSE诱导(a,e)和CFSE选择性平均值(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的选择性平均值。用于非典型对照(激活的组织起来蛋白质不含treg)计算选择性平均值。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差系统性。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

所示5 现象CD4+T蛋白质对加速重大突破的T蛋白质诱导的选择性不够恰当。SP第举例来说用浅蓝色的本站和红色回应，HD第举例来说用紫色的本站和红色回应，紫色的本站/红色回应其会sp606。用于CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T蛋白质顺利完成分选。CD4+CD25−(需要的话者)被cfsel标识，treg按检视的比领军氢氧化钠。用抗CD3 /28微珠诱导蛋白质，培养出来3天内顺利完成流式蛋白质心法(CD25反染)和蛋白质因子系统性。HD Treg与HD、SP或sp606需要的话者联合培养出来。(a,b) CFSE诱导(a)和CFSE选择性百分领军(b)。(c,d) CD25选择性百分领军(c)和CD134选择性百分领军(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在上海交通大学中所的隐含。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差系统性。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

结论：我们得出的结论是，来自加速重大突破子的诱导潜意识CD4+Treg在GITR隐含中所赢取了扩展和丰富，忽视了进一步熟悉研究Treg在1M-白血病高风险个躯中所的异质性的必要性。

中文翻译出处：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28